布来恩特·尼尔森是一位从事研究工作的化学家,致力于研究纳米粒子是否会导致遗传损伤的量化方法。下面他向《美国科学家》杂志主编法尼拉·桑德斯(Fenella Saunders)讲述了自己的研究工作。

 

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布莱恩特·尼尔森

 

  近年来,含有纳米粒子的产品出现激增。纳米粒子即直径约为或不足100纳米的粒子物质。在如此小的范围内,熟悉的元素和化合物呈现出新奇而颇为有用的属性。但尚不清楚有多少纳米粒子会扩散到环境中,也不知道它们会对环境造成怎样的伤害;例如,一些研究表明,用来抗菌的银纳米粒子可能会损害肝和大脑细胞。目前纳米粒子和散状物料在法律规定方面是完全相同的。布来恩特·尼尔森(Bryant C.Nelson)现就职于美国国家标准和技术研究院(NIST),是一名化学家,同时也是美国自然科学协会(Sigma Xi)的一位杰出讲师,从事纳米粒子是否会导致遗传损伤的量化方法研究。
 
  问:自然纳米粒子同工程纳米粒子之间是否存在区别?
 
  答:我们称之为工程纳米材料,但实际上自古以来它们就作为自然纳米材料而存在着。碳纳米管就是一个很好的例子。它们普遍存在于自然环境中,其最初形态来自于火山爆发,甚至汽车尾气,但我们也可以通过化学反应原理对这些碳纳米管进行构思设计。
 
  问:在消费品中使用纳米材料只是一种时尚吗?
 
  答:这肯定不是一种时尚。在其制造生产中有很多商业利益。比如,从袜子到洗衣机,很多商品中都有抗菌特性的工程银纳米粒子的存在。某些纳米材料可以用来制造生产强度更高的材料,有一些或许可以应用于医疗方面。
 
  问:随着这些产品越来越成为主流,是否会有更多的纳米粒子释放到环境中?
 
  答:我们要知道可能进入环境的纳米材料的类型和数量,那么我们就必须要有一套方法,量化机制及规程来测量被释放到环境中的纳米材料数量,识别其类型。由于释放到环境中的纳米粒子有多种类型,所以量化工作会很复杂。我们需要新的方法和技术对多种不同形式的纳米材料加以区分。针对要检测的不同空间当中(无论是水,沉积物还是空气)的纳米粒子,我们提出两大主要策略:粒子的识别和粒子的量化。最近讨论的焦点就是怎样识别单个粒子。
 
  问:纳米粒子与细胞相互作用会出现什么情况?
 
  答:我们正在研究分子水平的相互作用。比如,我们正试着去了解,碳纳米管是如何改变DNA属性的。

 

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随着氧化铜纳米粒子水平的增加,萝卜芽的发育状况(由左至右),可看出其对基因和结构损害的程度不断加深

 

  问:DNA可以自我修复,那么其对于防范损伤的能力有多大呢?
 
  答:即使户外散步这样的简单行为也会使我们的DNA受损。例如,紫外线可能会对我们的DNA产生损害,那么我们的身体就必须要有一个机制对此做出修复。所幸,人类和其它生物体内存在大量冗余的DNA修复系统。电离辐射可能会产生自由基,如羟基,从而导致DNA的氧化。如果足够接近DNA,自由基可以与DNA在细胞的液体中互相作用并引起变化。氢氧根自由基附着在DNA碱基分子上,而一个给定的碱基结构可以是折叠的,也可以是展开的。否则会导致DNA碱基的缺失。
 
  问:DNA损伤是否还会造成遗传密码本身的改变呢?
 
  答:氧化改性碱基会导致DNA序列发生改变。如果细胞不断复制,改性碱基逐步稳定,突变形成的几率就会增大,可能会导致癌症。
 
  问:纳米粒子是如何导致此种DNA损伤的?
 
  答:已确认有几种不同的机制。如果纳米粒子足够小,就可以进入核膜孔,被输进细胞核,与DNA直接相互作用。纳米粒子可能会与DNA结合,那也许会造成各种各样的破坏。一个主要机制就是通过纳米粒子产生自由基。一些金属纳米粒子能够和存在于每一个细胞中的过氧化氢相互作用,并将其转化为能够进入细胞核的氢氧自由基,那么就有可能会造成DNA损伤。
 
  问:纳米粒子是如何进入细胞中的?
 
  答:实际上,一些纳米粒子可通过内吞作用进入细胞,即被细胞膜中的囊泡吞没。如果有足够多的纳米粒子进入细胞,就会增加细胞的氧化应激。这时,细胞招募不同类型的中性粒细胞和巨噬细胞,从而强化了自由基的生成,进而使自由基可游走于整个细胞中。
 
  实际上,这是细胞对于外源粒子进入而产生的一种自然反应。但纳米粒子可以逾越细胞的自然抗氧化防御机制。若产生了太多的羟基,以至于细胞无法应对,那么就会发生氧化爆发,使细胞无力承受。
 
  问:如何量化纳米粒子对DNA造成的损害?
 
  答:利用碱基切除修复蛋白,我们将碱基从DNA链中移除。进一步,使用改性碱基,培育一种已知属于稳定同位素的化学物质。然后我们计算出在DNA样本中被修改的碱基比率,并将其与加入的DNA数量做出比较。最终我们将得出在该DNA样本中,每一个碱基的受损量。
 
  问:在这些实验中,是否使用几种不同的筛选模型呢?
 
  答:从最简单的,到最复杂的,我们用了几种不同的模型。一开始只有简单的DNA,然后用纳米粒子来培育它,尝试测量DNA修饰的产生,并对于纳米粒子可能与DNA之间的相互作用做出一个基线评估。之后是细胞。最终我们能够从更高级的生物体(如植物、线虫)身上提取DNA。
 
  问:DNA样本的规模需要有多大呢?
 
  答:我们需要将近50微克的DNA。这大约是500万HeLa细胞或25万秀丽隐杆线虫。在实验室里,我们培育着数十亿的细胞,所以有着充足的DNA样本。
 
  问:这些实验需要重复多少次才可以设立一个标准呢?
 
  答:再现性的确是至关重要的。每一个实验,我们都要完整地做两至三次,以确保我们测量的真实性。这是现在科学领域的重大问题。如果你发现了一个反应,无论是正面的还是负面的,都需要通过反复实验研究来验证其正确性。
 
  问:是否已发现影响纳米粒子属性的具体条件呢?
 
  答:用于颜料、化妆品和其他各种产品的二氧化钛纳米粒子,光照下可以产生自由基,同时也有一些研究却得出了相反的结论。我们对实验做了如下设置:将DNA与二氧化钛纳米粒子分别在不同的光照条件下进行接触。结果发现,黑暗中二氧化钛不会诱使DNA损伤。在可见光中,DNA是否损伤取决于二氧化钛的用量。紫外线光照条件下,DNA损伤程度较深。研究表明,需要利用可控的测量条件来评估是否发生了DNA损伤。
 
  问:纳米粒子是否也可以减少DNA损伤或是对抗癌症呢?
 
  答:碳纳米管可以在各种类型的细胞环境中清除自由基。与此同时,我们想研究出一种方法来确定碳纳米管是否可以防止或减少氧化DNA损伤。我们用单链DNA把碳纳米管包起来,将其暴露于定量的超声波中,众所周知,这将产生类似电离辐射的自由基。
 
  我们想知道碳纳米管是否能够对清除自由基产生影响。答案是肯定的,正是基于碳纳米管清除自由基的能力,才能减少DNA损伤的程度。但是在此项研究成为可行治疗之前,还有很多工作要做。
 
  问:某些纳米粒子可以用来靶向癌细胞吗?
 
  答:我们想要开发一个程序来确定金纳米粒子(直径大约是1.4纳米)是否可以抑制DNA修复蛋白。目前为止,已有一些证据表明答案是肯定的。如果想要用这些粒子来靶向癌细胞,还需要一些基础性工作,比如把这些粒子研制成某种形态的抗癌药物。虽然这些纳米粒子有很多用途,但在具体应用之前,还有大量的工作要做。
 
  问:在纳米粒子的安全性方面,你们的研究是否有助于其政策导向呢?
 
  答:美国国家标准和技术研究院(NIST)并不参与政策制定或政策性决策,只是提出相关方法。但我认为,我们应该继续研发完善的、高度敏感且可再现的测量方法,供实验使用以确定这些纳米粒子究竟有害还是有益,这就是我们工作的正确方向,也是我们的使命。

 

资料来源 American Scientist

责任编辑 遥 醒